前言：超高通量組織研磨儀使樣品均質(zhì)化更徹底，方便后續(xù)萃取;真空離心濃縮儀濃縮樣品，方便快捷。
青霉素 G(Penicillin G)作為β-內(nèi)酰胺類抗生素對于人和動(dòng)物尿道、胃腸道和呼吸道感染等疾病具有較好的治療優(yōu)勢。[1]但是在獸用治療中的用藥不規(guī)范會(huì)導(dǎo)致藥物在奶和動(dòng)物組織中的殘留，這些藥物殘留及其代謝產(chǎn)物會(huì)對有相關(guān)過敏史的人產(chǎn)生健康危害。
超高效液相色譜-質(zhì)譜法（UPLC-MS）是一種將超高效液相色譜（UPLC）與質(zhì)譜（MS）結(jié)合的高效且精準(zhǔn)的分離檢測技術(shù)。[2]相關(guān)研究中采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定了肉類中青霉素 G及其代謝產(chǎn)物芐青霉噻唑酸、芐青霉去羧噻唑酸和芐青霉二酸的方法。
在此基礎(chǔ)上，我們對該實(shí)驗(yàn)方法加以改良與補(bǔ)充，通過超高通量組織研磨儀576對樣品進(jìn)行研磨提取操作，該方法提取質(zhì)量高，效果均一，無交叉污染，并經(jīng)真空離心濃縮樣品，后續(xù)通過超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，靈敏快速地對樣品進(jìn)行檢測分析。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、稱取處理成小塊的組織樣品于50mL研磨管中，加入青霉素V內(nèi)標(biāo)[3]，加2mL水，乙腈定容至20mL，經(jīng)超高通量組織研磨儀研磨提取。
2、離心后取10mL上層清液，經(jīng)真空離心濃縮至蒸干。
3、蒸干后加入2mL乙酸銨緩沖溶液溶解殘余物，渦旋15s，加入5mL正己烷，渦旋1min，轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，離心去除上層有機(jī)相，正己烷重復(fù)去脂一次。4、吸取1mL水相于2mL聚丙烯離心管中，離心后過水相濾膜，待測。
5、另取7支離心管中分別按標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度加入適量標(biāo)準(zhǔn)溶液，再加入等量空白樣本，混勻，放置10min后，與樣品一起處理，制作工作曲線系列。
[1]注：本實(shí)驗(yàn)方法僅供參考，具體詳細(xì)參數(shù)可查閱相關(guān)文獻(xiàn)確定。
實(shí)驗(yàn)方法優(yōu)勢：
在UPLC-MS方法中，樣品處理液中強(qiáng)極性和弱極性雜質(zhì)成分使用六通切換閥切換至廢液而不進(jìn)入質(zhì)譜儀，分析多份樣品后不需清洗質(zhì)譜儀的樣品錐，同時(shí)采用基體匹配標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)標(biāo)法定量，有效補(bǔ)償了基體效應(yīng)。[1]
在此基礎(chǔ)上通過超高通量組織研磨儀和真空離心濃縮儀進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)步驟，超高通量組織研磨儀使樣品均質(zhì)化更徹底，方便后續(xù)萃取；真空離心濃縮儀補(bǔ)充了溶液蒸發(fā)過程中的爆沸，減去了添加飽和NaCl的步驟，減少后續(xù)離子干擾，使本實(shí)驗(yàn)方法更快速安全，靈敏準(zhǔn)確。
文中所用儀器：
1、真空離心濃縮儀
真空離心濃縮儀可用于化學(xué)、生物、醫(yī)藥等領(lǐng)域的樣品制備和分析，在生命科學(xué)領(lǐng)域中，真空離心濃縮儀常用于分離和濃縮蛋白質(zhì)、核酸和其他生物分子。真空離心濃縮是一種將溶劑蒸發(fā)出去以濃縮或干燥生物(非生物)樣品的過程。采用離心力、真空和加熱相結(jié)合的方法使樣品中的溶劑快速蒸發(fā)，從而達(dá)到濃縮樣品的目的，方便后續(xù)實(shí)驗(yàn)的分析和檢測。
2、超高通量組織研磨儀
超高通量組織研磨儀是一類性能穩(wěn)定，處理通量高，重復(fù)性好的研磨設(shè)備，可任意定制各種規(guī)格適配器，廣泛應(yīng)用于組織破碎，生物活性物質(zhì)提取等領(lǐng)域。
參考文獻(xiàn)：
[1]劉創(chuàng)基,王海,杜振霞,等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定牛肉中青霉素類藥物及其代謝產(chǎn)物[J].分析化學(xué),2011,39(05):617-622.
[2]胡瑞雪.食品殘留青霉素的熱解產(chǎn)物青霉噻唑酸的毒性分析與評價(jià)[D].吉林大學(xué),2024.DOI:10.27162/d.cnki.gjlin.2024.002900.
[3]European Commission，Council Regulation ( EEC) ． 2377 /90 /EC． Off． J． Eur． Commun． ，1990，L224: 1
